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目的基因的连接物是什么?载体的连接物是什么?

经过同一种限制性内切酶切割后会产生相同的粘性末端,所以目的基因可与目的基因连接,载体可与载体连接,也有目的基因和载体连接。 用限制性内切酶切了以后,让片段自己连接,就会出现三种连接方式,然后我们选择出来需要的重组片段

目前已知有三种方法可以用来在体外连接DNA片段: 第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;(人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性...

如果用同一种限制酶切割载体两端或目的基因两端,那么载体两端由于有相同的黏性末端,自身就可以连起来,同样,目的基因两端也就能够连起来,这样就达不到将目的基因连接到载体的目的。

数量一般在 目的基因:载体=5:1-10:1。 双酶切的话,目的基因多加点没关系。目的基因越小,越往10:1上靠;目的基因片段大,反之。 不过现在有很多种连接方法,体系不同,具体你还是要参考连接酶的说明书的。

2.片段和载体酶且要完全,确定大小没问题不过有些载体本身就很很难连接!建议在连接时,先加入载体和目的基因,85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白。然后再加入酶和BUFFER。适当延长连接时间24小时以内都没问题的!如果还是不行,...

虽然你的问题写的乱七八糟,但是我还是回答一下: (2)含tctR重组质粒。 含ampR重组质粒。 回答你最后的问题:因为这些宿主细胞内已经包含有重组质粒,重组质粒DNA可以表达出相应分解四环素或者青霉素的酶,从而使这些抗生素失效,所以这个宿主...

水浴锅 金属浴 PCR仪都可以 16度 理论上是过夜 不过哥经实践证明2个小时足矣。。。

通常扩增基因所使用的引物两端会人为添加特异的酶切位点,连接过程中的酶切过程不影响基因本身的编码序列。

引物是DNA复制所必需的,它的作用就像转录所需的启动子一样,就像翻译所需的起始密码子一样!引物是DNA复制先识别的那部分…

【原题】某一质粒载体如图所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamHI酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得...

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